然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应




酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致***作用，应注意防护。有条件者应使用不致***、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。




【从全血中提取***组DNA】① 取10～250 μl的全血（含抗凝剂）加入至Collection Tube中。② 加入500 μl的Solution A。③ 加入1 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟后，冰浴5分钟。注） 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl；禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。【从培养细胞中提取***组DNA】三.使用悬浮培养的动物细胞时：① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的细胞悬浮液，5,000 rpm离心5分钟，弃上清（细胞培养液）。② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。