组成编辑完整的ELISA***盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或的固相载体(吸附剂);(2)酶标记的抗原或(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制(定量测定中);(5)结合物及标本的稀释液;(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;(7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为***,其浓度按加量及比色液的终体积而异,在板式ELISA中一般采用3mol/L。
1、 :操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 ***匀浆:将***加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
间接法1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;2.次日洗涤3次;3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二(抗)0.1ml;5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;6.’后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。

进口分装:检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。***盒的标准曲线点OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。***盒的标准曲线相关系数R≥0.98。***盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。***的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成***量不足的情况。