1、 :操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 ***匀浆:将***加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
间接法1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;2.次日洗涤3次;3.加一定稀释的待检样品(未知)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二(抗)0.1ml;5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;6.’后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双夹心法”的4、5、6。
使用研磨棒进行匀浆时:① 取1~100 mg的动物***或人***移入冰浴预冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊状。② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。【从植物材料或植物培养细胞中提取***组DNA】① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。