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终止液（3M　H2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入（98%）21.7ml。（5）　底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml0.1M柠檬酸（19.2克/L）　 24.3ml加蒸馏水50ml。（6）　TMB（四）使用液:TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml底物缓冲液（PH5.5）　 10ml0.75%H2O2　 　32μl（7）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg底物缓冲液（PH5.5）　 1ml3%H2O2　 　2μl（8）　抗原、和酶标记。（9）　正常人和阳性对照。



蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。酶标记工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。