ELISA可用于测定抗原,也可用于测定。然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。
特点编辑一、、灵敏、特异的;二、稳定的重复性和可靠性;三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;四、适用、血浆、***匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;五、节省实验经费。
主要设备编辑***(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):Na2CO3 1.59克NaHCO3 2.93克加蒸馏水至1000ml(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15MKH2PO4 0.2克Na2HPO4·12H2O 2.9克N*** 8.0克KCl 0.2克Tween-20 0.05% 0.5ml加蒸馏水至1000ml(3) 稀释液:牛白蛋白(BSA) 0.1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊、兔等与洗涤液配成5~10%使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀***盒里的各种成份及样品。9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,***。实验完成后应立即读取OD值。11. 加入***的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
哺乳动物细胞溶质中的SOD呈绿色,并且由两种亚单位构成,一种含有铜,另一种含有锌(Cu/Zn-SOD)。线粒体和***SOD为红紫色并含有锰(Mn-SOD)。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD。为了测定SOD的活性,研究人员尝试了许多间接的或者直接的方法,其中,NBT的间接法为常用,因为它很方便。但是,NBT法有几个缺点,例如生成的染料水溶性差,而且会和氧化酶的还原型发生反应。虽然cytochrome C法也常被用来做SOD检测,但它和超氧化物反应过于剧烈,不能测定低水平的SOD。