组成编辑完整的ELISA***盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或的固相载体(吸附剂);(2)酶标记的抗原或(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制(定量测定中);(5)结合物及标本的稀释液;(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;(7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为***,其浓度按加量及比色液的终体积而异,在板式ELISA中一般采用3mol/L。
主要设备编辑***(1) 包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):Na2CO3 1.59克NaHCO3 2.93克加蒸馏水至1000ml(2) 洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15MKH2PO4 0.2克Na2HPO4·12H2O 2.9克N*** 8.0克KCl 0.2克Tween-20 0.05% 0.5ml加蒸馏水至1000ml(3) 稀释液:牛白蛋白(BSA) 0.1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊、兔等与洗涤液配成5~10%使用。
洗板方法手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
实验结果计算以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。