酶活性测定的原理直接测定反应生成物,酶促反应速率及其测定——以单位时间内反应物或生成物浓度的改变来表示。
酶活性测定方法常见的酶活性检测方法有:耦合反应、化学测定法、同位素法、测压法、电极法、HPLC法等。
影响酶活性试验的因素①酶浓度
一般将底物过量,使酶可以充分与底物结合并发挥其催化功能。
②底物、辅因子的种类和浓度
1. 选合适的底物种类和浓度:
如所测的酶专一性不强,可作用于多种底物,首先就需决定选择哪一类底物作为测此酶的底物。确定底物种类后,重要的问题是选择底物的合适浓度。
酶活性测定反应终止方法①改变PH值使蛋白质变性沉淀
②急热100度
③用1%SDS中止反应,注意protease K等在SDS下仍有活性。
④金属离子参与反应的,可加入EDTA
⑤加入
⑥法测定时可加入大量非性基质
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