多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

制备柱跑干了影响柱效吗?

如果时间不长的话，可以用流动相多冲几个小时，柱效不一定变化很大。如果时间太久，柱效一定变低，具体造成影响有多大，要靠柱效测定来确定，而不是干柱时间的长短。如果跑干了，对于PUMP的影响可能还大些，所以尽量先把管路中的空气抽走再说。

一般说来，制备柱子跑干，属于操作失当。柱子闲置不用时，尽量冲入***或其他有机的溶剂，一定要把两头堵住密封，这样保留的时间会较长。

工业制备色谱

用于制备和生产的大规模生物分离技术所面临的问题是:如何在不***目标蛋白质的生物活性的前提下(温和的条件)，以很高的识别性，以及较高的分离能力和收率，经济有效地从稀溶液中提取、分离、纯化目标产物。吸附通常可以在常温、水相、适当的pH、离子强度、避免使用等***的化学***等温和的条件下操作，液相色谱具有很高的分离性能，适合于生物分离过程的要求。

分析物的性质

在HPLC上分析的样品通常不耐热，并且在较高温度下会降解，而在GC中，溶质可承受高达400℃的温度，并且具有挥发性。用于HPLC分析的样品通常是液体或溶解在液体中的固体。除液体和溶解的固体外，GC还可以处***体。GC样品的分子量较低，而HPLC可用于分析涵盖从高分子量聚合物到大型生物分子的一系列样品的高分子量化合物。