多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

制备色谱之DAC如何次次装出高柱效

动态轴向压缩柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工业化制备液相色谱分离的重要组成部分。当用户填装直径50mm以上制备柱时，传统预装柱很难装出高柱效和对称性，另外预装柱使用过程柱头容易塌陷，导致柱效变差，无法满足长期持续纯化生产。DAC在运行过程中，活塞可以提供持续压力，保证很优的填装柱床密度和稳定性，从而长时间保持很佳分离效果。相比于预装柱或弹簧柱，DAC可以轻松填装和拆卸，实现不同填料反复填装和轻松切换。有人说大柱子不用考虑柱效和对称性，只要能分出样品就行。现实是色谱就是靠柱效来分离的，柱效越高，分离越好，载量越大，收率和得率越高。

通常制备色谱方法开发在4.6mm，10mm或20mm的半制备柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DA***50, DAC600或DAC800。理论上多大规模的色谱柱都可以实现与分析柱或半制备柱同样的效率，在现实中，设计优良的DAC柱效甚至高于预装柱。只有柱效和对称性类似才能保证了分离方法的线性放大。

工业制备色谱

蛋白质的特点使得其分离过程与传统化工分离过程有着极为不同的特点:(1)分离对象是具有特定的生物活性的生物大分子产品，分离过程设计中不恰当的物理和化学环境等(如温度、PH值、缓冲液选择、、搅拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白质分子结构发生改变，从而使之失活;(2)由于发酵液、细胞培养液或匀浆液中，我们所需要的目标产物往往存在于含有许多性质十分相似的杂质的稀溶液中，如何从这样一种复杂的稀溶液中经济有效地提取产物是生物分离技术面临的重大课题;(3)从卫生和安全角度出发，对于用***工程产品，有着极高的纯度和同一性要求，对其中的***杂质去除率要求极高，对分离设备材质和分离过程中引入的分离介质也有着严格的限制。

纸层析

纸层析，又称纸色谱，以一种特殊设计的滤纸作为固定相。滤纸中的纤维素层含有的水分作为固定相。缓冲液和其他溶剂用作流动相。分离的原理是相似相溶。纸色谱法可以分析的样品非常广。用毛细管或微量吸管将流动相中溶解的样品标记在滤纸上，然后将滤纸放入容器中，使其浸入溶剂中，于阴暗处进行层析，样品将在滤纸表面分离，然后对其形成的颜色进行识别。纸色谱可以分析碳水化合物、蛋白质、氨基酸、***、糖苷、血液和尿液等样品中的代谢物。