什么是液相色谱?
液相色谱(liquid chromatography,LC)是一种色谱技术,用于分离和分析溶液中混合物的化学成分,以确定是否存在或不存在特定成分,如果存在,则存在多少。我们中的许多人会从上学开始就熟悉平面LC的形式,在滤纸上打上黑色墨水标记,将一端浸入水中,然后观察墨水中的成分颜色是否分开。但是,分析应用中使用的大多数LC均基于柱色谱法,这将是本文的***。顾名思义,液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是使用高色谱分辨率进行分离的高的性能分析。分离的组分也可以在检测后使用馏分收集器分离,作为纯化的手段。HPLC有多种不同的配置,可用于分离分子量从半挥发性小分子到几万千道尔顿的大蛋白生物分子的溶解组分。液相色谱法是一种非常流行的分析技术,广泛用于环境监控,农业领域。
色谱分离基本原理
在色谱法中存在两相,一相是固定不动的,我们把它叫做固定相;另一相则不断流过固定相,我们把它叫做流动相。 液相色谱的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相(气体、液体)通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时,混合物中的各组分与固定相发生相互作用。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异,与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同,随着流动相的移动,混合物在两相间经过反复多次的分配平衡,液相色谱使得各组分被固定相保留的时间不同,从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合,实现混合物中各组分的分离与检测。
液相色谱仪
根据应用方向可以分为制备、半制备、分析等类型,使用前两种的应用都是为了制备样品,而后一种则是为了分析样品,做定性定量实验。它们在原理上相同,却也有着各自的区别,现在对前两类液相色谱仪进行比较。
都是制备型仪器,制备、半制备液相色谱仪针对的样品量和分离速度不同,半制备分离纯化的样品量少,由于泵的压力和流速会低一些,分离效率会相对低一些。但它在纯化小样和分离微量元素方面有很大用途。制备型仪器可以用在生产中,比如食品原料中农残去处,***生产中去除无效成分或***成分等。半制备型仪器更多用在实验中,它经常和全自动固相萃取仪搭配使用来更大程度纯化样品。由于泵的功率不同,仪器中各个部分的尺寸和材质也略有不同,半制备型仪器中各部分需要承受的压力较小,处理样品量少,所以从色谱柱到管道、阀门等通量都较小,而制备型仪器就要大一些以应对较大量的样品进入。操作方面基本一致,除了尺寸外没有什么其它实质区别。
制备液相色谱原理
英文名称 preparative liquid chromatograph,即将分析色谱的进样量增大,同时得出大量的所需物质(馏分)的过程,其目的是从混合物中得到纯物质。
制备液相色谱是指采用液相色谱技术制备纯物质,即分离、收集一种或多种色谱纯物质。制备液相色谱中的“制备”这一概念指获得足够量的单一化合物,以满足研究和其它用途。制备液相色谱的出现,使液相色谱技术与经济利益建立了联系。制备量大小和成本高低是制备液相色谱的两个重要指标。
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