反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和***或其他杂质？

TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。

首先，冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和***，***实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是很简单、有效的。

其次，如果你的***的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，尽量装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。

制备色谱的填充

填料是工业制备色谱的血脉，填料的选择和利用是非常关键的，目前已有越来越多的产品应用到IPC中。填料的化学性质和物理性质决定了色谱的分离性能和动力学性能。应用于大规模工业化制备色谱中的填料具有如下特殊的要求。　　

1、机械强度高：填料需要承受很大的机械压力，因为填料在IPC使用中，需要经常装卸，机械性能差的填料经受不住反复填充，它们易破碎，产生细颗粒，降低柱渗透性，甚至堵塞滤片，造成流速分布不均匀，影响分离产物的纯度，在系统中产生极高的柱压而无法继续使用引。　　

2、负载量大：在IPC中，填料的负载量越大，则单位体质量填料可处理的原料量就可增加，因而提高了产率。选择合适孔径及孔径分布的填料是获得高负载量的一个关键因素。　　

3、可大量供应，批间的重现性好：制备色谱工艺过程要扩大，必须有可靠的供货源提供大量填料，否则无法实现工业化。填料各批量之间的化学和机械稳定性、孔结构及可重复的比表面积等必须具有高度的重现性，否则难以保证长期、持续、稳定的分离与纯化生产工艺。　　

4、合适的颗粒大小和窄的粒度分布范围：细颗粒可增加塔板数及分辨率，但同时引起装柱困难，需要更高的操作压力。

氧化铝基质的基本特点

氧化铝基质的一大特点是结构稳定，既可呈酸性，又可呈碱性。其次，铝元素在自然界含量丰富，仅次于氧元素和硅元素。在实际应用中，色谱用氧化铝填料主要应用于正相色谱、反相色谱和离子交换色谱。对于一些不饱和化合物，特别是芳香族化合物的保留效果较佳，有时还可用于分离芳烃类异构体。除此之外，氧化铝基质的pH耐受范围在3-12，可用于分离碱性化合物。以上这些特点使得氧化铝在某些领域能与硅胶形成良好的互补作用。