样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？

（1）了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。

（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂以助溶。

（3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择***，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱，一般不会影响峰型。

（4）可以固体上样。

同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？

一般会有一定的变化，原因有以下几点：

（1）制备柱的装填是否均匀，如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样，停留时间不同，色谱峰可能变宽。

（2）如果样品在流动相中溶解度小，在制备色谱上会有不同的峰展宽。

（3）如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象，放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重，导致分离失败。

流速的分类

色谱中的流速通常有两种表述方式，一种是体积流速，即单位时间内流过某截面的流体的体积，单位mL/min，实际的分离过程中多用此来表示流体的速度；另一种就是线流速，即流体中任一质点在单位时间内沿管路方向所通过的距离，单位cm/min，该表示方式多用于理论分析。通常，在分离纯化过程中应采用佳流速以期得到好的分离效果。佳线流速从根本上是由填料粒径和形状所决定，而佳体积流速可由佳线流速与柱子内径的截面积相乘而得到。二者之间可通过色谱柱的内径互相换算。

***液相色谱

***液相色谱，又称为“近代柱色谱”，是色谱法的一个重要分支。其所使用的固定相由小颗粒组成，以增加表面积，提高分离速率，因此它被称为***液相色谱。其原理与柱色谱相似。流动相携带混合物的组分以不同的速度通过色谱柱，其通过的速率取决于组分对流动相和固定相的相对亲和力。通过不同的检测器检测样品中的各组分，如紫外可见光检测器、蒸发光散射检测器或示差折光检测器等。大分子（如蛋白质、脂肪）、小分子（如单胺类）以及化学成分相似的物质（如单胺类、类固醇）都可以用***液相色谱分析。***液相色谱，应用范围广，应用于法医、食品、临床、环境和生物技术等领域。