如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？

制备色谱柱为ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为Agilent1100或LC-6A。想用其制备面积***化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。如何设定色谱条件，如，流量、进样量、样品的浓度、切割点的设置、是否要浓缩，要求将95%以上的主峰切除。

（主峰后有二个杂质靠得很近。）

答：

1.制备用的流动相尽量等级高一点，否则流动相中的杂质会影响LC-MS分析。

2.使用馏分收集器时，延迟体积一定要计算准确，检测器的响应时间设到很小，否则都会影响收集的纯度和回收率。制备柱的流速一般与直径的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速为1mL/min，9.4mm制备柱用1*（9.4/4.6）2,大约为4mL/min。进样量设到几个mg应该基本没有过载。进样样品浓度越高越好。假如进样10mg，理论计算0.05%的杂质大约只有5μg，显然浓度太低，尽量是多做几次，合并馏分然后浓缩后做LC-MS分析。

　制备色谱仪分类有多种　　

1、按流动相物理状态可分：制备型气相色谱仪、制备型液相色谱仪和制备型超临界流体色谱仪。　　

2、按分离模型可分：制备型线***谱仪和制备型非线***谱仪。　　

3、按分离对象的属性可分：制备型有机色谱仪和制备型无机色谱仪。　　

4、按固定相物理状态可分：制备型气液色谱仪、制备型气固色谱仪、制备型液液色谱仪和制备型液固色谱仪。　　

5、按用途可分：制备型生物色谱仪、制备型制药色谱仪、制备型化工色谱仪、制备型食品色谱仪、制备型菌体色谱仪等。

分析物的性质

在HPLC上分析的样品通常不耐热，并且在较高温度下会降解，而在GC中，溶质可承受高达400℃的温度，并且具有挥发性。用于HPLC分析的样品通常是液体或溶解在液体中的固体。除液体和溶解的固体外，GC还可以处***体。GC样品的分子量较低，而HPLC可用于分析涵盖从高分子量聚合物到大型生物分子的一系列样品的高分子量化合物。

色谱柱大小

与气体相比，液体的密度和粘度更高，因此HPLC色谱柱通常较短且较宽。典型尺寸为10或25厘米，φ为0.46。

但是更大的色谱柱也已用于制备规模的应用，比如φ10、20、30的液相制备色谱柱。

恒谱生有各种直径大小的分析、制备液相色谱柱可供选择，柱管由316L不锈钢制成，不锈钢柱内壁多经过抛光，减小管壁效应，提高柱效的同时还能做到平衡时间短，高流速，低背压，缩短分析时间，节约溶剂，降低成本。

另一方面，由于气体密度较小且粘度较低，因此GC中建议使用更长的内径较窄的色谱柱。毛细管柱的长度可以达到几米。