液相色谱

液相色谱是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中．为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。经典液相色谱的流动相是依靠重力缓慢地流过色谱柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分离后的样品是被分级收集后再进行分析的，使得经典液相色谱不仅分离效率低、分析速度慢，而且操作也比较复杂。

什么是液相色谱?

液相色谱的定义是二十世纪早期由俄罗斯植物学家 MikhailS. 茨维特提出的。他先尝试在装满颗粒的柱子上使用溶剂来分离从植物中提取的化合物(树叶色素)。茨维特用颗粒填满开口的玻璃柱。他发现两种特殊的材料，粉笔末(碳酸钙)和氧化铝很有用。他将样品(混匀植物叶的溶剂提取物)倒入柱中，并让样品流过颗、粒床。随后加入纯溶剂。随着样品由于重力自上而下流过柱子，可看到不同颜色的谱带被分开，因为有些组分比另外一些移动得快。他将这些分开的不同颜色的谱带与样品中原有的不同化合物相关联。他还根据每一种化合物对填料的化学亲和性强弱，提出了分析这些化合物的分离规律。与颗粒填料有较强亲和性的化合物移动慢，与溶剂有较强亲和性的化合物移动快。这个过程可这样描述:样品中的化合物在流动的溶剂(流动相)与固体颗粒(固定相)间的分布不一样。这样使每一种化合物以不同的速度移动，从而产生了化合物之间的分离。

制备液相色谱特点和优点

高压—压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降的压为75 Kg/cm2以上。

高速—流速为0.1~10.0 ml/min。

***—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

速度快—通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

分辨率高—可选择固定相和流动相以达到较好分离效果。

灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

柱子可反复使用—用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少，容易回收—样品经过色谱柱后不被***，可以收集单一组分或做制备。