超级制备色谱主要有哪些模式?
制备色谱是以分离出纯物质为目的的色谱系统,分析色谱是以分析出样品组分信息为目的的色谱系统,基于他们目的的不同,制备色谱相对于分析色谱有很多不同特征。制备色谱常用的色谱模式有低压,中压,高压三种,以应对不同类型和不同纯度要求的样品的分离,同时尽可能减少成本。
低压:一般而言,低压适合易分离化合物,但分离时间长很容易造成敏感化合物分解。中压:中压一般采用恒流泵提供恒定的流动相流速,填料颗粒更小,分辨率更高,耐受更高压力和更快流速。高压:高压通常在分离制备的后阶段采用,应用于分离困难的样品,纯度甚至能达到99.9%。与传统的纯化方法(如蒸馏、萃取)比较,制备色谱是一种更有效的分离方法,因此被广泛应用在样品和产品的提取和纯化上。随着合成、植化、生化和制药等领域对高纯度组份的需求不断增加,制备型液相色谱仪应用的领域也在迅速的扩大发展。
超级制备色谱系统
问:TFA在缓冲液中是不是只起到调节pH的作用呢?TFA的浓度越高基线的漂移越厉害,那是不是说它的浓度在缓冲液pH允许的情况下越低越好呢?
答:(1)TFA起到类似离子对的作用,一般浓度在0.05-0.1%,过高的浓度,会使溶液偏酸,长时间使用可能影响柱子寿命。
(2)同时TFA可以***硅胶表面硅醇基,改善碱性化合物的峰型。有时0.1%TFA分离不好的话。可以考虑加大浓度到0.2%。但要注意用完后及时冲洗色谱柱。
(3)走梯度时,因为走成基线漂移,但对制备的影响不大。
***液相色谱 ( HPLC)
分离度降低原因和解决方法
1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)
重新配置流动相
2、保护柱或分析柱阻塞
去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。
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