如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？

制备色谱柱为ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为Agilent1100或LC-6A。想用其制备面积***化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。如何设定色谱条件，如，流量、进样量、样品的浓度、切割点的设置、是否要浓缩，要求将95%以上的主峰切除。

（主峰后有二个杂质靠得很近。）

答：

1.制备用的流动相尽量等级高一点，否则流动相中的杂质会影响LC-MS分析。

2.使用馏分收集器时，延迟体积一定要计算准确，检测器的响应时间设到很小，否则都会影响收集的纯度和回收率。制备柱的流速一般与直径的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速为1mL/min，9.4mm制备柱用1*（9.4/4.6）2,大约为4mL/min。进样量设到几个mg应该基本没有过载。进样样品浓度越高越好。假如进样10mg，理论计算0.05%的杂质大约只有5μg，显然浓度太低，尽量是多做几次，合并馏分然后浓缩后做LC-MS分析。

样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？

（1）了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。

（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂以助溶。

（3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择***，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱，一般不会影响峰型。

（4）可以固体上样。

工业制备色谱

工业色谱又称制备色谱。利少{J组分的差速迁移而实现I.业规模混合物分离的方法它包括一个流动相(被分离的气相或液相)和一个固定相。两相在色谱柱r}，进行接触，在色谱柱‘l，流动相沿固定相流动，由」几混合物中各组分被固定相滞流程度不同，它们随流动相移动的速度就不同，因而可使各组分.4.相分离。根据流动相的不}.可，可分为}L相色谱与液相色谱两类。根据固定相的类型，可分为吸附色谱、分配色iH离子交换色谱、亲和色潜‘排I}}L色谱五类。上业色谱可分离选择性系数非常接近的组分，它适用于热敏N}物质的分离，对制备高纯物质特别有效

常见色谱填料

色谱理论认为，不同的物质之间，只要存在物理、化学或生物学性质的差异，就会在不同的物相上具有不同分配系数，即可在色谱过程中得到分离、分析或测定。如果说，色谱柱是进行色谱分离的主要场所，人们常将其比喻为色谱仪的心脏；那么，色谱填料就是组成心脏的一个个细胞，因此，色谱填料的性质决定了色谱柱的性能。

根据不同的基质，色谱填料可分为：有机聚合物填料、无机基质填料、有机-无机复合型填料。目前，无机基质填料仍牢牢占据大部分市场，主要包括硅胶、氧化铝、羟基磷灰石、活性碳等。