多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

制备色谱柱如何测柱效？

可以选择几种物质，苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流动相一般用65-80%的***/水，测定后根据保留时间计算塔板数。由于制备色谱的管路死体积一般比较大，很难得到和供应商相同的柱效。建议在制备柱开始使用时在自己的色谱上测一下柱效，然后定期检测柱效进行以进行比较。

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薄层色谱（TLC）

薄层色谱，又称为薄层层析，以合适的溶剂作为流动相，以涂布在支持板上的支持物作为固定相。分离的原理是吸附。一个或多个样品涂在有薄层板上。如下图所示，该板部分浸入展开剂中，溶剂沿着吸附剂移动。样品组分随展开剂以不同的速率移动，这取决于它们对吸附剂的亲和力，从而实现组分分离。薄层色谱与纸色谱类似，可用于分析任何类型的样品，但通常用于分析植物提取物、碳水化合物、蛋白质、***等。