液相色谱的五大系统
1、进样系统进样系统分为手动进样阀和自动进样器。
2、输液系统输液泵按输出液恒定的因素分恒压泵和恒流泵。对液相色谱分析来说,输液泵的流量稳定性更为重要,这是因为流速的变化会引起溶质的保留值的变化,而保留值是色谱定性的主要依据之一。因此,恒流泵的应用更广泛。
输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。机械泵中又有螺旋传动***泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵和往复式隔膜泵。
3、分离系统分离系统包括色谱柱、保护柱以及柱温箱。
色谱柱:色谱柱是样品分离的核心。色谱柱在使用前必须仔细阅读说明书,了解色谱柱使用的pH值范围、溶剂耐受范围、压力范围和维护方法等事项。色谱柱使用完后,需及时对色谱柱进行冲洗。冲洗完成后,应该将色谱柱从仪器上拆下来,两端用厂家配的堵头密封后,保存在色谱柱盒里。
保护柱:保护柱的作用主要是防止吸附性强的杂质对色谱柱污染,从而延长色谱柱的寿命。针对不同型号的色谱柱,应选择相对应填料的保护柱。应注意柱芯也是有寿命的,应该定期进行更换。
柱温箱:色谱柱温度变化,可能会导致保留时间的变化。为了避免这个问题,建议使用柱温箱。
4、检测系统液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。
5、数据处理系统该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作,使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。
色谱柱的技术都有哪些?比如,封尾等,这些技术在应用时都体现在哪里?
色谱柱技术包括填料技术,封尾技术和装柱技术等,填料技术自不待言,填料的差异对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响,色谱填料的键合相密度的不同也会影响到填料表面硅羟基外露的多少,进而影响填料的选择性。封尾技术中用到的封尾***的差异也会对色谱柱的性质产生很大的影响,如体现在色谱填料的pH耐受范围,水相耐受范围,极性强弱等。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一门艺术,需要经验积累。
半制备液相色谱仪的分类
1、按固定相和流动相的极性大小可分:正相半制备液相色谱仪和反相半制备液相色谱仪。
2、按分离对象的属性可分:有机物半制备液相色谱仪和无机物半制备液相色谱仪。
3、按产地可分:国产半制备液相色谱仪和进口半制备液相色谱仪。
4、按分离规模可分:小型半制备液相色谱仪和大型半制备液相色谱仪。
5、按梯度数目可分:两元梯度半制备液相色谱仪、三元梯度半制备液相色谱仪和四元梯度半制备液相色谱仪等。
6、按用途可分:生物半制备液相色谱仪、制药半制备液相色谱仪、化工半制备液相色谱仪、食品半制备液相色谱仪、氨基酸半制备液相色谱仪和***半制备液相色谱仪等。
液相色谱的前世今生
早在古代罗马时期,人们已知道将一滴含有混合色素的溶液滴在一块布或一片纸上,通过观察溶液展开产生的同心圆环来分析染料与色素。实际上,这种简单操作已经采用了现代色谱学的基本原理。
19世纪中叶,德国化学家Runge对古罗马人的这种方法作了重要的改进,使其具有良好的重现性与定量能力,使盐溶液可在纸上分离;另外,化学家Goppalsr-oeder也在长条纸上分离了染料和动植物色素,这些研究标志着纸色谱法的建立,并逐步发展成为现代色谱技术。
1903年,俄国植物学家Tswett在华沙自然科学学会生物学会会议上发表了题为“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”中,提出了应用吸附原理分离植物色素的新方法,这一工作标志着现代色谱学的开始。他将碳酸钙装入竖直的玻璃柱中,从顶端倒入植物色素的石油的醚浸取液,进一步采用溶剂冲洗,使溶质在柱的不同部位形成色带,首先向人们公开展示了采用色谱法提纯的植物色素溶液以及色谱图显示着彩色环带的柱管。Tswett将这种方法命名为色谱,管内填充物被称之为固定相,冲洗剂被称之为流动相。
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