你对制备色谱陌生吗?还不进来看看它的特点
很多初接触色谱领域的朋友对制备色谱这个名词比较陌生。其实,在化学化工***等广泛采用的层析法以及薄层色谱就是较为典型的制备色谱,换句话说,将分析色谱的进样量增大,同时得出大量的所需物质(馏分)的过程就可以称为制备色谱。分析色谱的目的,是分析出混合物中一个(或者几个)纯物质的含量。制备色谱的目的,是从混合物中得到纯物质。而制备色谱系统则是利用制备色谱的思想能得到纯化物质的多个分析测试设备联用的总称。 分析色谱是制备色谱的基础。当我们在分析色谱上取得了良好的分离效果时,可以将其放大,应用到制备色谱上,由此,我们需要考虑调整上样量,流速,梯度:
1.上样量的调整: 他与分析色谱柱和制备色谱柱的柱长和柱内径有关:
具体关系时;制备柱上样量/分析柱上样量=制备柱长/分析柱长*制备柱内径的平方/分析柱内径的平方;
2.流速的调整:
制备柱流速/分析柱流速=制备柱体积/分析柱体积=制备柱长/分析柱长制备柱内径的平方/分析柱内径的平方;
3.梯度的调整:
制备柱梯度/分析柱梯度=制备柱体积/分析柱体积*制备柱流速/分析柱流速;
液相色谱的发展变化介绍
液相色谱色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 液相色谱的发展,涉及键合相,基于被测物质在固定相(含液体)和流动相之间的相对溶解度的差异,通过溶质在两相之间进行分配以实现分离。将固定液机械地涂渍在担体上组成固定相。化学键合固定相。这种固定相是通过化学反应把各种不同的有机基团键合到硅胶(载体)表面的游离羟基上,代替机械涂渍的液体固定相。这不仅避免了液体固定相流失的困扰,还大大改善了固定相的功能,提高了分离的选择性,化学键合色谱适用于分离几乎所有类型的化合物。
***液相色谱仪原理
***液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谱的理论,把原来的流动性改变为很高压力可达到4.9′107Pa。色谱柱则是用特殊的方式用小颗粒装填而成。造成的结果就是色谱柱的柱效远远高于原始的经典液相色谱。并且它柱子使用后还能具有高度灵敏度检测器。能够对流出来的分析物进行连续检测。
液相色谱法的常见问题
样品准备是成功的关键;在将所有样品加载到自动进样器中之前,必须对所有样品进行过滤,这一点非常重要。当使用UHPLC时,如果不过滤样品,使用亚2微米颗粒的色谱柱进行***分离时很容易发生阻塞,这一点就尤为重要。对于流动相也是如此,尤其是在使用缓冲区的情况下。
对于样品使用正确的进样溶剂或稀释剂至关重要,溶剂强度应等于或小于流动相起始条件的强度。如果使用太强的溶剂,则会观察到峰分裂和重现性差。如果自动进样器中使用的清洗溶剂太强,可能会观察到类似的问题。
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