样品如果溶解度太低如何上制备HPLC?
(1)了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质,通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。
(2)样品可能某种晶型难溶,这样可以加入其他溶剂以助溶。
(3)不是一定要用流动相来溶解样品,对溶解度差的样品,可以选择***,THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO,对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留,不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱,一般不会影响峰型。
(4)可以固体上样。
工业制备色谱
蛋白质是具有一定构象(空间结构)的生物大分子:其一级结构是形成肽链的氨基酸序列(数目、种类、顺序),是蛋白质结构的基础;在一级结构水平上,部分肽链发生卷曲和折叠,形成其二级结构,这种卷曲和折叠是靠肽链中的羰基与氨基之间的氢键维持的:在二级结构的基础上,多肽链再盘绕和折叠,形成三维空间形态,即为蛋白质的三级结构:而蛋白质的四级结构是指同一蛋白质中各条肽链之间的相互关系。
蛋白质的特点使得其分离过程与传统化工分离过程有着极为不同的特点:(1)分离对象是具有特定的生物活性的生物大分子产品,分离过程设计中不恰当的物理和化学环境等(如温度、PH值、缓冲液选择、、搅拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白质分子结构发生改变,从而使之失活;(2)由于发酵液、细胞培养液或匀浆液中,我们所需要的目标产物往往存在于含有许多性质十分相似的杂质的稀溶液中,如何从这样一种复杂的稀溶液中经济有效地提取产物是生物分离技术面临的重大课题;(3)从卫生和安全角度出发,对于用***工程产品,有着极高的纯度和同一性要求,对其中的***杂质去除率要求极高,对分离设备材质和分离过程中引入的分离介质也有着严格的限制。
***液相色谱
***液相色谱,又称为“近代柱色谱”,是色谱法的一个重要分支。其所使用的固定相由小颗粒组成,以增加表面积,提高分离速率,因此它被称为***液相色谱。其原理与柱色谱相似。流动相携带混合物的组分以不同的速度通过色谱柱,其通过的速率取决于组分对流动相和固定相的相对亲和力。通过不同的检测器检测样品中的各组分,如紫外可见光检测器、蒸发光散射检测器或示差折光检测器等。大分子(如蛋白质、脂肪)、小分子(如单胺类)以及化学成分相似的物质(如单胺类、类固醇)都可以用***液相色谱分析。***液相色谱,应用范围广,应用于法医、食品、临床、环境和生物技术等领域。
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