多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

反相色谱分离后，如何快速从流动相中得到产品？

可以考虑先在低温下，减压旋蒸除去其中的有机的溶剂，然后用萃取的方法把产品萃取出来，然后再低温再旋蒸，这样，就可以不将温度升得很高而得到产品。如果要直接蒸掉流动相，水泵的真空度要注意（要检查气密性），否则蒸水会很慢。一般比较好的泵在60～70度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要80～90度才行，这样容易暴沸导致样品损失。温度太高可能引起物质变性。

工业制备色谱

产品纯度：目标产物有效成分的含量

纯度要求由其纯化目的来决定。一般情况下，微量的天然产物只需富集到70%就可进行初步鉴定；而在多步反应中，有些中间产物的纯度在80%左右即可满足要求；供核磁及红外测试的样品纯度需达到95%；而做定性和定量分析的标准样品含量则要求至少在99%以上。纯度是制备纯化工艺中关键标准，通常制备纯化工艺中的分离与收集过程决定终样品的纯度。