液相色谱在使用过程中四大关键因素

1.液相色谱仪本身：对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请***或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。

2.色谱条件：色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。

流动相就涉及到配制流动相所用到的水和***试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，***试液要求用色谱级别的，原因为防止水和***试液中的杂质对色谱结果的干扰。

3.操作人员：首先，作为液相操作人员，一定要认真学习夜想的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护***，掌握基础故障的排除和维修。

4.液相安装环境：液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对***的危害。

液相色谱分析的流程

由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。

遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在较佳条件下得以分离。

***液相色谱的重要性

　国产的液相色谱仪在工作了一天之后，都需要停机一夜等到第二天才可以继续工作，可按照以下的步骤停机。关闭二次仪表;关闭检测器电源，同时切断柱箱温度的检测器电源;停止恒流泵之后切断它的电源;用二次蒸馏水冲洗进样阀的进样孔;切断工作室的电源，加满盛液瓶中的流动相，等到第二天的使用。给色谱仪盖上防尘罩。色谱仪器是需要好几周或者好几个月的暂不使用，除了按照短期停机的步骤之外，还应该拆除替代柱的导管，拔下总电源接线板的插头，贮存好专门用的流动相和样品，擦干净仪器，盖上防尘罩，存放位置需干燥。

液相色谱法的常见问题

样品准备是成功的关键；在将所有样品加载到自动进样器中之前，必须对所有样品进行过滤，这一点非常重要。当使用UHPLC时，如果不过滤样品，使用亚2微米颗粒的色谱柱进行***分离时很容易发生阻塞，这一点就尤为重要。对于流动相也是如此，尤其是在使用缓冲区的情况下。

对于样品使用正确的进样溶剂或稀释剂至关重要，溶剂强度应等于或小于流动相起始条件的强度。如果使用太强的溶剂，则会观察到峰分裂和重现性差。如果自动进样器中使用的清洗溶剂太强，可能会观察到类似的问题。