HPLC概述

***液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项***、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的***固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。

与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。

***液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用***液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用***液相色谱来分析。

***液相色谱

***液相色谱与光谱技术联用方法的研究也一直是色谱学科的研究热点。20世纪80年代，可同时得到每个组分HPLC-UV三维谱图的二极管阵列检测器（DAD）问世，对紫外-可见光谱的快速扫描检测，使液相色谱能提供的信息大幅度增加，为模式识别等化学计量学中的许多手段提供了重要的应用领域。90年代以后，HPLC-MS、HPLC-FTIR等色谱-光谱联用技术逐渐成熟，为解决HPLC定性问题提供了多种实用、有效的手段。

为适应生命科学的发展，以制备色谱为主要对象的非线***谱获得了长足的发展，人们运用色谱法已能够制备微量而贵重的生物活性化合物。而为了满足天然产物分离制备、生物制药等方面的需要，大规模的工业色谱技术、模拟移动床色谱技术得到发展，目前，日处理量达到千克级的液相色谱系统已经随处可见。

HPLC的各系统

概括HPLC是有五大系统构成：动力系统，进样系统，分离系统，检测系统，数据分析和记录系统构成。

其中：

动力系统：泵

进样系统：六通阀和进样针，或者自动进样器

分离系统：色谱柱

检测系统：检测器，一般有紫外检测器，荧光检测器，示差折光检测器，MS检测器等等。

记录系统：电脑工作站等

连接这些设备的都是由一根根不锈钢管或者PEEK管构成。

色谱柱的安装

（1）拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。

（2）拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。

（3）按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如，条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57 mm、内径为0.1～0.3 mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止。