液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

制备液相色谱含义

制备液相色谱是指采用色谱技术制备纯物质,即分离、收集一种或多种色谱纯物质.制备色谱中的'制备'这一概念指获得足够量的单一化合物,以满足研究和其它用途.制备色谱的出现,使色谱技术与经济利益建立了.制备量大小和成本高低是制备色谱的两个重要指标.其中,气相制备色谱主要用于石油化工产品和挥发性天然产物的色谱纯样品制备。

液相色谱的注意事项

特别提示

1).流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。2).柱子是非常脆弱的，首先做的方法，先不要让液体过柱子。

3).所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4).压力不能太大，尽量不要超过150kgf/cm2.

5).因为缓冲***遇有机的溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。

液相色谱法

色谱法的创始人是俄国的植物学家茨维特（ M.Tswett）。1906年，俄国植物学家茨维特发表了他的实验结果：为了分离植物色素，他将含有植物色素的石油的醚提取液倒入装有碳酸钙粉末的玻璃管中，并用石油的醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸钙颗粒表面的吸附力不同，随着淋洗的进行，不同色素向下移动的速度不同，从而形成一圈圈不同颜色的色带，使各色素成分得到了分离。他将这种分离方法命名为色谱法(chromatography)。