反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和***或其他杂质？

TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。

首先，冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和***，***实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是很简单、有效的。

其次，如果你的***的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，尽量装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。

什么是色谱填料？

1. 亲水色谱填料：

主要适用于非极性至中等极性的中小分子化合物的分离，硅胶表面的硅羟基或其极性基团极性较强。主要应用于合成化学、天然产物、精细化工、石油产品等领域的分离和提纯。

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流动相

HPLC中使用的流动相是液体，而在气相色谱法中则是气体。由于液体的密度和粘度较高，因此要使用泵来给流动相推动压力通过HPLC色谱柱，因此液相色谱的背压通常很高，比如超高压液相色谱。背压太高会对液相系统造成负担，因此适当的控制在合适的压力程度，有助于我们分析测试的正常运行。恒谱生的液相色谱柱、保护柱、在线过滤器等都能做到低背压，死体积小，避免对分析结果造成影响。