液相色谱的分离过程

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

液相色谱仪

根据应用方向可以分为制备、半制备、分析等类型，使用前两种的应用都是为了制备样品，而后一种则是为了分析样品，做定性定量实验。它们在原理上相同，却也有着各自的区别，现在对前两类液相色谱仪进行比较。

都是制备型仪器，制备、半制备液相色谱仪针对的样品量和分离速度不同，半制备分离纯化的样品量少，由于泵的压力和流速会低一些，分离效率会相对低一些。但它在纯化小样和分离微量元素方面有很大用途。制备型仪器可以用在生产中，比如食品原料中农残去处，***生产中去除无效成分或***成分等。半制备型仪器更多用在实验中，它经常和全自动固相萃取仪搭配使用来更大程度纯化样品。由于泵的功率不同，仪器中各个部分的尺寸和材质也略有不同，半制备型仪器中各部分需要承受的压力较小，处理样品量少，所以从色谱柱到管道、阀门等通量都较小，而制备型仪器就要大一些以应对较大量的样品进入。操作方面基本一致，除了尺寸外没有什么其它实质区别。

半制备液相色谱层析系统如何关机

      1、点击中断后冲几分钟，将流速设为0，待压力为0后将吸头转移到中，并把流速设为10;

　　2、冲到已经没有东西被冲下为止，一般需要半个小时。一般此时压力早已稳定;

　　3、将流速设为0，点击界面上的关闭(在启动旁边);

　　4、关闭窗口，弹出的窗口都点肯定的，如确定是等;

　　5、关闭仪器和电脑;

　　6、关闭插板。