样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？

（1）了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等,以达到较好的溶解度。

（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂以助溶。

（3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择***，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱，一般不会影响峰型。

（4）可以固体上样。

制备柱跑干了影响柱效吗?

如果时间不长的话，可以用流动相多冲几个小时，柱效不一定变化很大。如果时间太久，柱效一定变低，具体造成影响有多大，要靠柱效测定来确定，而不是干柱时间的长短。如果跑干了，对于PUMP的影响可能还大些，所以尽量先把管路中的空气抽走再说。

一般说来，制备柱子跑干，属于操作失当。柱子闲置不用时，尽量冲入***或其他有机的溶剂，一定要把两头堵住密封，这样保留的时间会较长。

反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和***或其他杂质？

TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。

首先，冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和***，***实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是很简单、有效的。

其次，如果你的***的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，尽量装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。

离子交换色谱

离子交换色谱，用离子交换树脂作为固定相，主要用来分离带电离子的混合物。流动相中的组分离子与离子交换树脂（固定相）上的离子基团进行可逆交换，这种可交换的离子是阴离子或阳离子。

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