液相色谱在使用过程中四大关键因素

1.液相色谱仪本身：对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请***或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。

2.色谱条件：色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。

流动相就涉及到配制流动相所用到的水和***试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，***试液要求用色谱级别的，原因为防止水和***试液中的杂质对色谱结果的干扰。

3.操作人员：首先，作为液相操作人员，一定要认真学习夜想的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护***，掌握基础故障的排除和维修。

4.液相安装环境：液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对***的危害。

液相色谱的五大系统

1、进样系统进样系统分为手动进样阀和自动进样器。

2、输液系统输液泵按输出液恒定的因素分恒压泵和恒流泵。对液相色谱分析来说，输液泵的流量稳定性更为重要，这是因为流速的变化会引起溶质的保留值的变化，而保留值是色谱定性的主要依据之一。因此，恒流泵的应用更广泛。

输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。机械泵中又有螺旋传动***泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵和往复式隔膜泵。

3、分离系统分离系统包括色谱柱、保护柱以及柱温箱。

色谱柱：色谱柱是样品分离的核心。色谱柱在使用前必须仔细阅读说明书，了解色谱柱使用的pH值范围、溶剂耐受范围、压力范围和维护方法等事项。色谱柱使用完后，需及时对色谱柱进行冲洗。冲洗完成后，应该将色谱柱从仪器上拆下来，两端用厂家配的堵头密封后，保存在色谱柱盒里。

保护柱：保护柱的作用主要是防止吸附性强的杂质对色谱柱污染，从而延长色谱柱的寿命。针对不同型号的色谱柱，应选择相对应填料的保护柱。应注意柱芯也是有寿命的，应该定期进行更换。

柱温箱：色谱柱温度变化，可能会导致保留时间的变化。为了避免这个问题，建议使用柱温箱。

4、检测系统液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。

5、数据处理系统该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

半制备液相色谱仪的功能特点

1、丰富的功能

半制备液相色谱仪硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求;系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。

2、越的性能

①输液泵采用考虑材质结构制作的柱塞，增强型特氟龙密封圈，柱塞浮动式安装方式，增强仪器性能的稳定性和使用的持久性。

②检测器采用进口灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器，精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器，双路高速采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。

③混合器混合均匀，使用梯度程序采集的基线保持良好重现性。

3、简便的操作

半制备液相色谱仪便于用户对软件的熟练操作，软件采用多窗口模式，操作方便。

液相色谱的注意事项

特别提示

1).流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。2).柱子是非常脆弱的，首先做的方法，先不要让液体过柱子。

3).所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4).压力不能太大，尽量不要超过150kgf/cm2.

5).因为缓冲***遇有机的溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。