实验室级别的制备液相色谱主要用于以下领域
1.天然***化学、中药化学。这是国内目前广泛的使用方法,为了弄清楚植物中的微量有效成分,开放手工色谱柱早已不够用了,几乎每个搞天然药化的实验室都至少有一台液相,土豪实验室人手一台液相。
2.蛋白纯化。相对于前者,蛋白纯化的起步要稍微晚一点,但是发展很迅速。同时,由于外国仪器厂家在这个领域的优势不算太大,目前国内也在这个领域加快发展,抢占地盘。
3.***杂质纯化。由于合成工艺并不能做到100%的产率,往往伴有副产品,如何获得微量的杂质并确定结构和含量,这就得靠液相色谱。
4.手性化合物的制备。这个主要是有机合成和方法学的在用。
液相色谱的五大系统
1、进样系统进样系统分为手动进样阀和自动进样器。
2、输液系统输液泵按输出液恒定的因素分恒压泵和恒流泵。对液相色谱分析来说,输液泵的流量稳定性更为重要,这是因为流速的变化会引起溶质的保留值的变化,而保留值是色谱定性的主要依据之一。因此,恒流泵的应用更广泛。
输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。机械泵中又有螺旋传动***泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵和往复式隔膜泵。
3、分离系统分离系统包括色谱柱、保护柱以及柱温箱。
色谱柱:色谱柱是样品分离的核心。色谱柱在使用前必须仔细阅读说明书,了解色谱柱使用的pH值范围、溶剂耐受范围、压力范围和维护方法等事项。色谱柱使用完后,需及时对色谱柱进行冲洗。冲洗完成后,应该将色谱柱从仪器上拆下来,两端用厂家配的堵头密封后,保存在色谱柱盒里。
保护柱:保护柱的作用主要是防止吸附性强的杂质对色谱柱污染,从而延长色谱柱的寿命。针对不同型号的色谱柱,应选择相对应填料的保护柱。应注意柱芯也是有寿命的,应该定期进行更换。
柱温箱:色谱柱温度变化,可能会导致保留时间的变化。为了避免这个问题,建议使用柱温箱。
4、检测系统液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。
5、数据处理系统该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作,使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。
半制备液相色谱层析系统如何关机
1、点击中断后冲几分钟,将流速设为0,待压力为0后将吸头转移到中,并把流速设为10;
2、冲到已经没有东西被冲下为止,一般需要半个小时。一般此时压力早已稳定;
3、将流速设为0,点击界面上的关闭(在启动旁边);
4、关闭窗口,弹出的窗口都点肯定的,如确定是等;
5、关闭仪器和电脑;
6、关闭插板。
制备液相色谱
色谱法是根据混合物中各组分的化学特性对其进行分离的一种分离方法。
分析色谱强调的是各组分的完全分离以达到化合物确认和定量目的。而制备型(Prep)色谱或纯化色谱则是指利用色谱方法分离出一定量达到足够纯度的化合物用于后续实验或处理的色谱方法。
科学家首先要开发色谱方法,将目标化合物从原料、副反应或其它杂质中成功分离出来。从科研到工业企业纯化色谱应用非常广泛。尽管应用领域各不相同,用户的一般要求却非常相似,他们都希望分离出的终产物纯度能达到相当纯的化合物,实现科研或生产的需要。
采用液相色谱进行纯化LC纯化系统的配置与一般液相色谱系统基本相同,但增加了馏分收集器。样品混合物被进样至色谱柱,色谱柱根据组分特有的化学或物理性质对其进行分离。检出组分时,系统会将其输送至废液,或者进行收集用于后续实验。洗脱液收集操作既可由分析人员在组分洗脱时通过简单的手动方式完成,也可以全自动进行,在自动收集操作中,检测器信号会触发馏分收集器将液流输送至收集容器中。输送至收集容器的馏分纯度取决于分离过程中化合物与其它邻近洗脱杂质的分离度。制备色谱的核心竞争力总结起来就是“多,快,好,省”。
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