多肽的分离制备,如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。

关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6mm内径）上做一下实验,找到很大的分离度,这一过程的难度是很大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。

还可以考虑离子交换来分l离。

制备柱跑干了影响柱效吗?

如果时间不长的话，可以用流动相多冲几个小时，柱效不一定变化很大。如果时间太久，柱效一定变低，具体造成影响有多大，要靠柱效测定来确定，而不是干柱时间的长短。如果跑干了，对于PUMP的影响可能还大些，所以尽量先把管路中的空气抽走再说。

一般说来，制备柱子跑干，属于操作失当。柱子闲置不用时，尽量冲入***或其他有机的溶剂，一定要把两头堵住密封，这样保留的时间会较长。

反相色谱分离后，如何快速从流动相中得到产品？

可以考虑先在低温下，减压旋蒸除去其中的有机的溶剂，然后用萃取的方法把产品萃取出来，然后再低温再旋蒸，这样，就可以不将温度升得很高而得到产品。如果要直接蒸掉流动相，水泵的真空度要注意（要检查气密性），否则蒸水会很慢。一般比较好的泵在60～70度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要80～90度才行，这样容易暴沸导致样品损失。温度太高可能引起物质变性。