荧光分光光度计测试注意事项

①样品应盛在四面透光的石英比色皿（荧光池）中，如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。

②在荧光分析时，为了得到稳定且可靠的数据，一般需要开机预热氙灯大约30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯，预热时间可以缩短到10min左右。对某些易感光、易分解的荧光物质，尽量采用长波长、低人射光强度及短时间光照。

③温度变化可引起荧光强度的改变。通常降低温度，有利于提高荧光量的子产率，荧光强度增大。温度影响荧光强度的显著程度因样品而异，大部分荧光物质的荧光强度受温度影响不大，测试温度变化不超过±3℃，对测试结果几乎无影响。

④当荧光物质是弱酸或弱碱时，溶液的pH对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中，分子和离子的电离平衡会发生改变，而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。

⑤分子结构中存在π-π共轭的荧光物质在极性溶剂中，荧光效率显著增强。溶液中表面活性剂的加入能够显著提高荧光强度。

⑥瑞利散射和拉曼散射是溶剂的两种散射光，应注意不要误把瑞利散射和拉曼散射光谱当做荧光光谱。瑞利散射光波长与激发光波长相同，拉曼散射与激发光波长不同，而荧光物质的荧光波长与激发光波长无关，因此可以通过选择适当的激发波长将拉曼散射光与荧光分开。在测试时选择合适的狭缝宽度，或者空白扣除，也可以对散射光的影响进行校正。

⑦荧光物质分子与溶液中其它物质分子之间作用导致荧光强度降低，常见的荧光猝灭剂，如卤素离子、***离子、硝基化物质、重氮化合物等。

⑧测试过程中注意不要肉眼盯着氙灯光源看，以防眼睛造成损伤。

⑨仪器房应注意经常通风，避免产生的臭氧在室内富集。

浅析荧光光谱

无论分子初处于哪一个激发单重态，通过内转换及振动弛豫，均可返回到激发单重态的低振动能级，然后再以辐射形式发射光而返回至基态的任一振动能级上,这时发射的光称为荧光。由于振动弛豫和内转换损失了部分能童，故荧光的波长总比激发光波长要长。发射荧光的过程为 秒。由于电子返回基态时可以停留在基态的任一振动能级上，因此得到的荧光谱线有时呈现几个非常靠近的峰。通过进一步振动弛豫，这些电子都很快地回到基态的低振动能级。

荧光概论

物体经过较短波长的光照，把能量储存起来，然后缓慢发出较长波长的光，发出的这种光就叫荧光。物质在吸收入射光的过程中，光子能量传递给物质分子。分子被激发，电子从较低能级跃迁到较高能级，形成电子激发态分子。电子的激发态的多重态用2s+1表示，s为自旋角动量数的代数和，数值为0或1。分子中同一轨道里所占据的两个电子必须具有相反的自旋方向，即自旋配对。分子中全部电子都自旋配对，即s=0，该分子处于单重态，用S表示。若分子吸收能量后电子跃迁过程中不发生自旋方向的变化，这时分子处于激发的单重态；若跃迁伴随自旋方向改变，这时分子具有两个自旋不配对的电子，即s=1，分子处于激发的三重态，符号T表示。符号S0、S1和S2分别表示分子的基态、和第二电子激发单重态，T1和T2则分别表示和第二电子激发三重态。

荧光光谱的分析

分析方法 语音物质吸收电磁辐射后受到激发，受激原子或分子以辐射去活化，再发射波长与激发辐射波长相同或不同的辐射。当激发光源停止辐照试样之后，再发射过程立即停止，这种再发射的光称为荧光；若激发光源停止辐照试样之后，再发射过程还延续一段时间，这种再发射的光称为磷光。荧光和磷光都是光致发光。原子荧光光谱分析法具有很高的灵敏度，校正曲线的线性范围宽，能进行多元素同时测定。这些优点使得它在冶金、地质、石油、农业、生物***、地球化学、材料科学、环境科学等各个领域内获得了相当广泛的应用。