低温生物***的改良

改良

即采用遗传育种的方法，使菌株(从自然界分离筛选而得的出发菌株)的遗传因子 DNA发生突变、重组，从而从中选出产量高、成品质量好或具有新的培养特性如耐产物***、能利用廉价原料以及具有生产新品种能力的优良***。采用的方法有诱变育种、杂交育种、细胞融合技术和重组DNA技术。诱变育种是利用诱变因子如紫外线、钴－60、乙烯胺类等物理或化学诱变剂处理生产菌株的单孢子悬浮液，以获得诱发突变株。随后进行突变株的筛选，从中筛选高产菌株。由于随机的突变群体中，有益突变所占比例很低，要获得高产突变株必须进行大量筛选。可根据生物合成途径中的反应点,并通过它们的改变以提高产率或其他特性，如选育抗产物反馈***的突变株、增加细胞透性的突变株及营养缺陷型的突变株等。这种“理性筛选法”广泛应用于氨基酸产生菌的选育。

生物***发酵成有机肥如何操作的？

发酵肥料操作过程：

1、***一般用量为0.2%--0.5%。

2、原辅料及要求：主要物料：水果渣、干蔗渣、食用菌渣、酒糟、啤酒糟、糖渣、醋渣、淀粉渣、木薯渣、柠檬酸渣、酱油渣、味精渣、粉渣、豆腐渣、药渣、油渣、油饼粕、糠麸、棉菜粕、霉变饲料、污泥、糖厂啤酒厂渣泥、屠宰下脚料、潲（泔）水、剩饭菜、人动物粪便等大宗物料。

辅料：各种农作物秸秆、树叶杂草、瓜藤、稻草、松壳、花生壳、锯木屑、谷壳粉、统糠等干燥、粉碎、高碳即可。

3、原辅料配比：主料∶辅料=5:1-3:1。

4、水分控制在60-65%，手抓物料成团刚好出水。

5、按要求将***、主料和辅料全部混合均匀

6、环境温度15℃以上，一次堆料不少于4方，堆成宽1.5～2米、高0.6米左右、长度不限的堆，并用棍在堆内打通气孔。

7、堆温升至50℃时开始翻倒，每天一次，如堆温超过65℃，再加次翻倒。温度控制在70℃以下，温度太高对养分有影响。

8、腐熟标志：堆温降低，物料疏松，无物料原臭味，稍有氨味，堆内产生白色菌丝。

9、腐熟的原肥：直接使用，生产商品有机肥、生物有机肥、有机无机复混肥、生物有机无机复混肥等。

注意：

①视水分多少增减配比，发酵混合物的总水分应控制在60～65%。过高过低均不利于发酵，水过少，发酵慢；水过多会导致通气差、升温慢并产生臭味。水分合适与否判断办法：手紧抓一把物料，指缝见水印但不滴水，落地即散。

②如果按每吨添加1公斤尿素或10公斤过磷酸钙发酵效果。

低温生物***——常用***介绍

巨大芽孢菌

巨大芽孢菌(Bacillus megaterium de Bary，1884)：杆状，末端圆，单个或呈短链排列。1.2-1.5×2.0-4.0微米，严格好氧，能运动，革兰氏阳性，芽孢1.0-1.2×1.5-2.0微米，椭圆形，中生或次端生 。芽孢从椭圆形到长形不等；不能生成乙酰；菌株能运动，但运动缓慢，需要游离氧；发酵葡萄糖产酸；DNA的G+C含量为36%-38%。 

接触酶阳性；水解淀粉和酪素；V-P反应和卵黄反应阴性。琼脂平板微波状，平隆，浅黄白色转浅灰白色至浅灰褐色，表面略有光泽，在马铃薯块上生长，由浅黄***变为***。液化明胶慢、胨化牛奶、水解淀粉。 

工业上用于生产葡萄糖异构酶，巨大芽孢菌在回收***方面有着重要作用，还能降解土壤中难溶的含磷化合物，使之成为作物能吸收的可溶物巨大芽孢菌与球形芽孢菌混合培养时具有固氮增效作用，非常适合制成微生物肥料。 

巨大芽孢菌作为一种重要解磷***被广泛应用于农业生产中，将其优化培养制成菌剂肥料使用，可以提高土壤肥质，增产增收。近年来，随着微生物肥料在农业上的广泛应用，巨大芽孢菌以其在土壤中的解磷作用而被深入研究，是工业上生产解磷固钾肥的常用***，同时在水体处理和提高***发酵增香效果上有特别的作用。 

巨大芽孢菌能降解有机磷药和曲霉。张广志等人从长期受有机磷药污染的土壤中分离出3株能降解胺磷和芽孢菌，其中2株为巨大芽孢菌。孙丰芹发现巨大芽孢菌TRS-3对曲霉AFB1有去除作用，其发酵上清液降解AFB1的能力达到78.55%。 

侧孢芽孢菌

在延迟期， 短芽孢菌为革兰氏染色阴性，菌体呈细长的杆状；在对数生长期，为革兰氏染色阳性，菌体成短而粗的杆状；在静止期，革兰氏染色又转为阴性，菌体成细长的杆状，偶尔也能观察到椭圆形的芽孢。图1是50号菌用1%H2SO4(pH6.8)负染后的电镜照片：菌体杆状、周生鞭毛、大小约0.88μm×2.2μm。

作为非脊椎动物的病原菌，有关研究人员曾报道了这种***的杀线虫能力，由于所报道的这些侧孢短芽孢菌菌株都不产生伴孢晶体，所以这些菌株的杀线虫毒力因子并非来自于具有特征性的伴孢晶体。然而，***irnova TA，et al.分离到了2株能形成大的伴孢晶体的侧孢短芽孢菌菌株，这两株菌显示出很强的杀昆虫能力，研究证实，这种能力与菌体在形成芽孢过程中的伴孢晶体相关。有趣的是，Singer的实验表明，一株侧孢短芽孢菌的杀线活性源于一个热稳定蛋白的毒性。所有这些研究表明，不同侧孢短芽孢菌菌株拥有不同的线虫致病因子。牛秋红研究小组分离到的侧孢短芽孢菌G4菌株具有显著的杀线虫功能，但其并不产生伴孢晶体。从该菌株的发酵液里提取的粗蛋白酶液在12h内能杀掉所有测试线虫并在24h内完全降解。从侧孢短芽孢菌G4菌株中纯化出的丝氨酸胞外蛋白酶可水解多种底物，包括胶原和线虫体壁，具有很强的杀线虫能力，***病理电镜实验证实这种蛋白酶严重***了线虫体壁。而且，蛋白酶将线虫体壁分解成为一些氨基酸或小肽，这些营养物使病原***更好的生长繁殖。该蛋白酶***异源表达的菌株表现出了明显的杀线虫活性，重组蛋白酶在体外对线虫体壁降解，而蛋白酶缺失菌株丧失了大部分的杀线活性，死的线虫在生测中保持了完整的体壁，表明蛋白酶在线虫侵染中起主要作用。