低温生物***——筛选模型

根据不同的筛选目的，采用不同的筛选模型。如常规筛选产生菌的方法是将土壤中分离所得的纯种，在含有琼脂培养基的平皿上培养后，用打孔器将菌块移至含有试验菌的琼脂培养基上，在适宜的温度下培养一定时间后取出，如在菌块的周围有透明的抑菌圈，则表明此***具有产生***试验菌生长的抑菌物质的能力。所得***经过摇瓶液体发酵，选出生产能力高的***。另一方面对所提取的进行结构分析、药理试验及临床试验等，确为有效者，即可作为生产***。又如筛选脂肪酶生产***的方法是将分离所得的霉菌涂布于含有牛脂的琼脂培养基上，恒温培养一定时间，如菌落周围出现透明圈的，则该菌具有分解脂肪的能力，进一步作摇瓶发酵测定酶活力，挑选产量高者作生产***的出发菌株。

低温生物***——***分离方法

寄主分离法即从生长有某种***的寄主体上（如茯苓、木耳木段）取下木片，进行分离的方法。如木耳制种时，可选朵大、出耳多、质厚的耳棒（即长有木耳的木段）。采集后，削去耳根下的树皮，将其横断面锯成1 厘米厚的木片，在无菌条件下，切去无耳菌丝部分，留下有耳菌丝部分，浸入水中1 分钟，取出再用无菌水冲去木片上的液体。然后，用解剖刀将木片切成0 . 5 厘米的小块，放入斜面培养基内，置24 ～26 ℃下培养，及时淘汰杂菌，选取纯菌丝进行移植培养，即得***。

低温生物知多少？

实验室的传代保藏过程

1. 按说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。

2. 鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时，保藏为第2代，但工作用则为第三代。

3. 将第2代管冷冻保存，将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。

4. 取一支冷冻保存的G2代转种于平板和斜面培养基上，平板上的制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用（W3）。

5. 将第三代（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2经灭菌处理后丢弃。

6. 当工作用代数小于5时，可直接用上一代工作用转接下一代工作用，如W3可直接转接为W4。

7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分为两类。传代用和工作用，传代用用于甘油冷冻管法保藏，工作用用斜面低温保藏法保藏。

实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于***（需氧）、酵母菌的传代、保藏、***和芽孢类***则需应用其它方法。

生物***存活必备条件

1、保持土壤合理湿度

高温闷棚前，菜农多进行土壤翻耕，使得浇水水量极大，土壤湿度过高，通透性差，影响生物菌的增殖。因此，闷棚浇水时，要先起垄，浇小水保证土壤较为湿润即可，不要大水漫灌。

2、闭棚后不要立即升温

底肥需要生物菌发酵，若翻入土壤后立即浇水升温，多数***被扼杀，仅有少量嗜热菌可以存活，但粪肥发酵仅靠嗜热菌是完成不了的。

建议菜农翻地浇水后间隔几天，待土壤湿度降低，生物菌大量繁殖后再覆盖地膜、关闭通风口进行闷棚，此时低温***已经发挥作用，可以产生大量热量辅助闷棚，可大大改善闷棚效果。

3、促进生物菌快速繁殖

想要促进微生物快速增殖，可使用***含量高的菌剂，例如20亿的，可充分发挥菌剂作用。菜农要学会换位思考，生物菌喜欢什么样的条件，就创造什么样的条件，如此才能确保闷棚效果。