低温生物***——***分离方法

***分离法

先将所需的******采集回来，选取新鲜、个体大、壮实、中龄及无病虫害的子实体（或菌核、菌索），作为分离用的材料。若为子实体，取其菌盖或菌柄***；若为菌核，取其全部或部分（如茯苓）菌核；若为菌索，取其部分根状菌索（如蜜环菌）。再用75 %酒精进行表面消毒2 分钟，用无菌水（或冷开水）冲洗数次，洗净残留的药液后切成小块。，然后，放入PDA 培养基的试管或培养皿上，置24 ～26℃温度下，培养5 ～ 7 天。在分离的******周围见长有白色菌丝时，应及时将菌丝移至斜面试管培养基上，再置温度24 ～26 ℃下培养7～10 天，即得纯***。所得的纯***还可继续扩大培养或保藏。

低温生物知多少？

实验室的传代保藏过程

1. 按说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。

2. 鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时，保藏为第2代，但工作用则为第三代。

3. 将第2代管冷冻保存，将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。

4. 取一支冷冻保存的G2代转种于平板和斜面培养基上，平板上的制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用（W3）。

5. 将第三代（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2经灭菌处理后丢弃。

6. 当工作用代数小于5时，可直接用上一代工作用转接下一代工作用，如W3可直接转接为W4。

7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分为两类。传代用和工作用，传代用用于甘油冷冻管法保藏，工作用用斜面低温保藏法保藏。

实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于***（需氧）、酵母菌的传代、保藏、***和芽孢类***则需应用其它方法。

耐低温生物-选择开碧源

水医生--开碧源从17年开始就和清华大学及北京云阳张环保设备厂联合将耐低温从实验室的小试走向规模化的中试，在北京顺义马坡工业区污水厂进行耐低温的耐低温中试验证，俩套一模一样AO氧化接触工艺的日处理10吨的污水中试设备，从5月份开始同时培养微生物，一套投加耐低温生物，一套没有投加耐低温，驯化培养运行30天后，开始定期取样检测，经对比验证，添加耐低温的中试设备，从挂膜速度及COD氨氮磷及总氮的去除率，都比没有添加耐低温的中试设备高10--30%，中试一直连续运行到冬天，没有添加耐低温的中试设备做保温和加盖处理，添加耐低温的中试设备没有做保温和加盖处理。，没有做保温的中试设备，水温达到3.5度（保持在5度左右），水面已经结冰，做保温加盖的中试设备，水面没有结冰，水温保持在10度左右，进水量和进水水质指标都一样，持续低温运行，并连续取样化验，做保温的中试设备，进水和出水几乎一致，证明：普通在水温10度的时候，已经停止工作，几乎没有任何降解能力。

低温生物***的使用温度

普通硝化***在温度低于15°C时，活性大幅度降低，硝化速度也明显下降，温度低于5°C时，普通硝化***的生命活动几乎停止，处于休眠状态，普通中温微生物适合生长温度为25~37℃，目前污水处理厂的处理工艺大都可实现15°C左右氨氮达标排放，当温度低于12°C时，中温菌的活性大大降低，甚至没有繁殖功能，使得污水厂COD、氨氮和磷处理效果变差，出水无法达标排放，投加COD去除剂，氨氮去除剂，除磷剂等化学絮凝剂或氧化剂，在增加污水厂运营成本的同时，又形成了二次污染。