低温生物***——保存方法介紹

脱水存法

①沙土保存法，能产孢子的***及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。

② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。

③ 石蜡油封存法，在斜面***培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。

生物有机肥产品生产使用现状

***类生产用除常见的芽孢外， 还出现了高地芽孢菌、 类干酪乳菌、 屎肠球菌、 盐居固氮菌等新， 其中， 高地芽孢菌和盐居固氮菌普遍存在于土壤环境中， 未见致病性报道， 属风险一级； 类干酪乳菌又名为副干酪乳菌， 虽为风险一级 ， 但有从动物受伤部位分离到该菌的报道；屎肠球菌属于乳酸菌类，属风险二级， 建议谨慎使用。伯克霍尔德氏菌是一些具有生物防治、 促进植物生长和生物修复等功能的***， 但同时也是可以引起鼻疽、 类鼻疽病的致病菌， 因此***伯克霍尔德氏菌属于风险三级， 需做致病性试验， 建议慎用或不用。***类生产用菌株主要为丝状***和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 长枝木霉、 绿色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉红螺旋聚孢霉、 金龟子绿僵菌等属于生物安全风险等级二级， 需按照NY/T 1109－2017 《微生物肥料生物安全通用技术准则》 进行毒理学测试。酵母菌主要以酿酒酵母为主， 还有少量东方伊萨酵母、杰丁塞伯林德纳氏酵母 （原产朊假丝酵母、 杰丁毕赤酵母）、 膜醭毕赤酵母、 解脂耶罗威亚酵母等， 属于生物安全风险等级一级， 可免做毒理学试验。

生物有机肥产品生产安全性分析

虽然目前生物有机肥产品生产大多采用植物根际促生菌， 但近年来很多研究发现，芽孢菌属和类芽孢菌个别菌株能产生菌素。 即便在安全分级目录中列为一级免做理学试验的， 开展生物有机肥产品生产生物安全风险评价， 从源头上把好安全关是产品质量安全的首要保障。通过调研发现， 用于生物有机肥产品的部分生产分类地位不明确， 甚至混乱， 难以从源头上进行安全风险的初步识别 。 以常见生产枯草芽孢菌为例， 实际上是一个表型相似的群体， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎缩） 芽孢菌、莫哈韦（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索诺拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹罗芽孢菌等 10个缘种。生产企业送检的枯草芽孢菌生物有机肥产品， 经鉴定发现很多产品实际为解淀粉芽孢菌， 且许多菌株具有很强的溶血作用。通过对生产企业调研发现， 部分生产企业选择分离于动物肠道的解淀粉芽孢菌作为产品生产用菌株， 该类生产发酵周期短、 活菌数量高、 生产成本低， 但产品的应用***不佳， 溶血风险大 ， 建议慎用。而植物来源的解淀粉芽孢菌溶血风险小， 产品应用效果好， 推荐使用。

低温生物***的主要作用是什么呢？

增进土壤肥力

这是微生物肥料的主要作用之一。例如各种自生、联合或共生的固氮微生物肥料，可以增加土壤中的氮素含量；多种溶磷、解钾的微生物，如芽孢菌、假单胞菌的应用，可以将土壤中难溶的磷、钾分解出来，转变为作物能吸收利用的磷、钾化合物，使作物生长环境中的营养元素供应增加。一些微生物肥料的应用，增加了土壤中的有机质，提高了土壤的肥力。