低温生物知多少？

实验室的传代保藏过程

1. 按说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。

2. 鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时，保藏为第2代，但工作用则为第三代。

3. 将第2代管冷冻保存，将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。

4. 取一支冷冻保存的G2代转种于平板和斜面培养基上，平板上的制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用（W3）。

5. 将第三代（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2经灭菌处理后丢弃。

6. 当工作用代数小于5时，可直接用上一代工作用转接下一代工作用，如W3可直接转接为W4。

7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分为两类。传代用和工作用，传代用用于甘油冷冻管法保藏，工作用用斜面低温保藏法保藏。

实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于***（需氧）、酵母菌的传代、保藏、***和芽孢类***则需应用其它方法。

低温生物产品特性

自古以来生物的产品具有高选择性、高转化率和高转化速度的特性，可以在常温、低压或中压的发酵条件下进行生产。该产品还具有以下特点：

1、易工程化：采用通用性强的发酵工艺和设备，适应规模化生产；

2、高度灵活：代谢对H?/CO/CO?没有比例要求；

3、条件温和：常温、低压或中压等温和条件下操作；

4、耐受性高：抗杂菌、对硫化物等常规杂质具有较强耐受性；

5、高经济性：生产项目建设***低，1-2年可收回建设***，***回报率高；

6、绿色生产：利用H?、CO和CO?气体，固定二氧化碳, 节能减排降污染，能耗低，低水耗，环境友好。

低温生物***——常用***介绍

巨大芽孢菌

巨大芽孢菌(Bacillus megaterium de Bary，1884)：杆状，末端圆，单个或呈短链排列。1.2-1.5×2.0-4.0微米，严格好氧，能运动，革兰氏阳性，芽孢1.0-1.2×1.5-2.0微米，椭圆形，中生或次端生 。芽孢从椭圆形到长形不等；不能生成乙酰；菌株能运动，但运动缓慢，需要游离氧；发酵葡萄糖产酸；DNA的G+C含量为36%-38%。 

接触酶阳性；水解淀粉和酪素；V-P反应和卵黄反应阴性。琼脂平板微波状，平隆，浅黄白色转浅灰白色至浅灰褐色，表面略有光泽，在马铃薯块上生长，由浅黄***变为***。液化明胶慢、胨化牛奶、水解淀粉。 

工业上用于生产葡萄糖异构酶，巨大芽孢菌在回收***方面有着重要作用，还能降解土壤中难溶的含磷化合物，使之成为作物能吸收的可溶物巨大芽孢菌与球形芽孢菌混合培养时具有固氮增效作用，非常适合制成微生物肥料。 

巨大芽孢菌作为一种重要解磷***被广泛应用于农业生产中，将其优化培养制成菌剂肥料使用，可以提高土壤肥质，增产增收。近年来，随着微生物肥料在农业上的广泛应用，巨大芽孢菌以其在土壤中的解磷作用而被深入研究，是工业上生产解磷固钾肥的常用***，同时在水体处理和提高***发酵增香效果上有特别的作用。 

巨大芽孢菌能降解有机磷药和曲霉。张广志等人从长期受有机磷药污染的土壤中分离出3株能降解胺磷和芽孢菌，其中2株为巨大芽孢菌。孙丰芹发现巨大芽孢菌TRS-3对曲霉AFB1有去除作用，其发酵上清液降解AFB1的能力达到78.55%。 

生物***的特点

果实品质明显提高：菌群中的侧孢芽孢菌、枯草芽孢菌、凝结芽孢菌等可降低植物体内酸盐含量20%以上，能降低***含量，可使果实中Vc含量提高30%以上，可溶性糖提高2—4度。乳酸菌、嗜酸乳菌、凝结芽孢菌、枯草芽孢菌等可提高果实中必需氨基酸(赖氨酸和蛋氨酸)、***B族和不饱和脂肪酸等的含量。果实口感好，耐储藏。