低温生物***的筛选分离

筛选

工业发酵的有用***，其筛选步骤包括***分离、初筛和复筛，挑选具有某种能力的有用***。

分离

首先是从土壤或腐生植物中收集含菌样品，用无菌水稀释后，涂布于置有适宜***或霉菌生长的琼脂培养基平皿上，并将其倒置于恒温箱中，培养一定时间，平皿上长出的许多单个菌落（单一微生物的集落）经分别分离后即为各种纯种菌株，简称纯种，移种至试管斜面培养基上，置4℃冰箱备用。

低温生物***——制备

也称种子制备，是指***在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产***的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。种子制备包括孢子制备和菌丝体制备（见图），其中(1)～(4)为孢子制备过程。保存在沙土管或冷冻管中的生产***，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天(或较长时间)。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子，对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基。将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐 (6)的种子。如果有些生产***不产孢子，如产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶（5）液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆等）,及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应是生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

生物有机肥产品生产安全性分析

虽然目前生物有机肥产品生产大多采用植物根际促生菌， 但近年来很多研究发现，芽孢菌属和类芽孢菌个别菌株能产生菌素。 即便在安全分级目录中列为一级免做理学试验的， 开展生物有机肥产品生产生物安全风险评价， 从源头上把好安全关是产品质量安全的首要保障。通过调研发现， 用于生物有机肥产品的部分生产分类地位不明确， 甚至混乱， 难以从源头上进行安全风险的初步识别 。 以常见生产枯草芽孢菌为例， 实际上是一个表型相似的群体， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎缩） 芽孢菌、莫哈韦（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索诺拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹罗芽孢菌等 10个缘种。生产企业送检的枯草芽孢菌生物有机肥产品， 经鉴定发现很多产品实际为解淀粉芽孢菌， 且许多菌株具有很强的溶血作用。通过对生产企业调研发现， 部分生产企业选择分离于动物肠道的解淀粉芽孢菌作为产品生产用菌株， 该类生产发酵周期短、 活菌数量高、 生产成本低， 但产品的应用***不佳， 溶血风险大 ， 建议慎用。而植物来源的解淀粉芽孢菌溶血风险小， 产品应用效果好， 推荐使用。

低温生物***的应用前景及发展趋势

微生物在农业上的作用已逐渐被人们所认识。国际上已有70多个***生产、应用和推广微生物肥料。我国也有250家企业年产约数十万吨微生物肥料应用于生产。这虽与同期化肥产量和用量不能相比，但确已开始在农业生产中发挥作用，取得了一定的经济效益和社会效应，随着相关研究的深入和市场需求的不断扩大，微生物肥料生产已呈现出规模化工业生产模式。