人ELISA***盒的原理及优势:
1、ELISA是以immune学反应为基础,将抗原、antibody的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏***很高的试验技术。
2、由于抗原、antibody的反应在一种固相载体──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种***孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
3、Elisa生物试验是一种敏***高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其***稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在immune学检验的各领域中。
4、ELISA检测***盒适用于体外定性检测人血1清或血浆中的抗人类HEV病毒Mantibody ELISA检测。
5、ELISA的基础是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或antibody仍保持其immune学活性,酶标记的抗原或antibody既保留其immune学活性,又保留酶的活性。
总RNA的抽提方法:
目前常用的方法是用异硫qing酸胍苯1酚抽提法。
提取步骤:
先用液氮研磨材料,匀浆,加入Trizol***,进一步破碎细胞并溶解细胞成分。然后加入氯1仿抽提,离心,分离水相和有机相,收集含有RNA的水相,通过异丙1醇沉淀,获得比较纯的总RNA,用于下一步mRNA的纯化。也可将含有RNA样品的细胞破碎液通过硅胶膜纯化柱纯化。
RNA浓度和纯度判断:
OD260为1时相当于浓度为50 ug/mL;
OD260/0D280值在1.8~ 2.0之间,表示纯度较好;
0D260/OD280值低于1.8,样品有蛋白质或酚污染;
0D260/0D280值大于2.0,提取的RNA可能有降解;
电泳后如果rRNA大小完整,而且28S rRNA和18SrRNA亮度接近2:1、mRNA分布均匀,则认为RNA。
DNA提取过程中各种***的作用及原理
溶液III--3mol/L NaAc(pH4.8)溶液:
NaAc的水溶液呈碱性,为了调节pH至4.8,必须加入大量的冰醋酸。 所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液,调回pH至中性, 使变性的质粒DNA能够复性,并能稳定存在。而高盐的3mol/L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、 RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷,减少相斥力而互相聚合.
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