PEG法
其基本原理是在二价阳离子(Mg2+、Ca2+等)存在的情况下,PEG能够有效地诱导DNA产生颗粒状沉淀,从而使细胞膜能够通过内吞噬作用吸收这种DNA颗粒。
1993年Golovkin等用PEG法将H89的原生质体与含有鼠二氢叶酸还原酶(DHFR)突变***(氨甲1喋呤抗性)的质粒共培养,此***插入了玉米Ds1转座子中。筛选得到的愈伤***,在不含激1素的培养基上再生长出植株。同年Omirulleh等用PEG法将外源***导入到了HE89的原生质体中,建立了植株再生的转化体系。
PEG法虽然转化效率较高,但必须以裸1露的原生质体为受体,而且还受到***型的限制。
腺病毒的结构
腺病毒含13%DNA和87%的蛋白质,病毒体分子量约为175×106。病毒***组为线状双链DNA,大约含35kb~36kb,腺病毒12、18和31型的DNA组成中,G+C mol%***低(48%~49%),属于对动物具有高致***性***型。腺病毒1、2、4、5、8等型的G+C mol%较高(61%),致***性反而低或无。这是一种用于人腺病毒分离株的分组的标准,根据其***同源性将人腺病毒分为A~F等6组。
***导入细胞常用方法
噬菌体进入宿主***,病毒进入宿主细胞中繁殖就是感1染(infection)。用经人工改造的噬菌体活病毒作载体,以其DNA与目的序列重组后,在体外用噬菌体或病毒的外壳蛋白将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒,就能以infection的方式进入宿主***或细胞,使目的序列得以copy繁殖。infection的效率很高,但DNA包装成噬菌体或病毒的操作较麻烦。
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