RNA上样Buffer免费咨询「在线咨询」
作者:友名生物2022/3/24 2:32:22







RNA病毒检测***盒用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测病毒等此类病毒。


组分1. ConviFlex? RT-Taq Mix的冻干粉包含:MuLV逆转录酶、Taq聚合酶及dNTP。

其中MuLV逆转录酶,来自小鼠白血1病病毒(M-MuLV)并经过***修饰。

这里的Taq聚合酶另兼具热启动功能。

此Taq酶在室温下,活性被抗1体所***,当温度达到70°C以上时,才会被完全激1活。

在70°C 以下时,由于Taq酶没有完全活化,因此实验不会产生非特异性PCR产物和引物二聚体。热启动Taq酶的使用可使PCR具有更高的特异性和灵敏度。





提取DNA常用的方法

  一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

  二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

  三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

  四.异丙1醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)

  五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

  六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。

  七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。



为什么用无水乙醇沉淀DNA

  用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中较常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶, 乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。

  DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的***终含量占67%左右。 因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。

  但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大, 尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵, 后面的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙1醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。





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