DNA连接酶与DNA聚合酶的区别?
形成方式不同
DNA连接酶是在两个DNA部分片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA部分片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。
DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的DNA1片段上,形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用,催化原来的dna进行复1制,然后将原来的dna和复1制以后的dna进行模板配对后,连接聚合在一起,就可以形成新的dna链。
DNA连接酶不需要模板,因为DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。用DNA连接酶连接具互补粘性末端的DNA1片段或是用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA1片段连接起来。
DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链。DNA聚合酶的结构是三磷酸腺苷。
DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合,及在将其连接到载体上
这三个连续的步骤在连接酶的三个不同域进行,与双链DNA接触的各个域环绕DNA底物形成反应域。DNA连接酶主要用于产生新的核酸分子组合,以及在分子克1隆前将其连接到载体上。
用于分子克1隆的DNA连接酶是***来源或者噬菌体编码。所有真***,无论是嗜热或嗜温,包含一个单一的连接酶***,编码NAD*-依赖型的酶(Olivera and Lehman1967; Takahashi et al. 1984)。
在连接反应的第yi步中, 使用NAD的二磷酸作为磷酸1酐键和腺营基团转移到DNA连接酶赖氨酸残基的ε-氨基基团。腺苷酸残基然后转移到DNA底物的5-磷酰基末端,变得易于受到并列的3'羟基基团的亲核攻击。
这导致磷酸二酯键的形成,消去AMP,以及形成DNA链的共价连接。用于分子克1隆的DNA连接酶在连接非经典底物时能力有所不同,如平末端双链、DNA-RNA杂交体或单链DNA.这些以及其他的属性归纳于表5。分子克1隆中比较常用的催化体外连接的酶是T4噬菌体编码的DNA连接酶。
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