腺病毒的***组

腺病毒的***组以线性的双链DNA形式存在，由蛋白VII和一种称为mu的小蛋白紧密地环绕在其周围，起到类组蛋白样的作用。另一种蛋白V将这种DNA-蛋白复合物连接起来，并通过蛋白VI与病毒衣壳连接在一起。在两条链的5′端各以共价键结合着一个被称为DNA末端蛋白（pTP）复合物（DNA-TPC）的特化的结构，与腺病毒copy密切相关。腺病毒***组的两端各有一段100bp的反向末端重复序列（ITR），是copy的起始位点。在左端ITR的3′侧有一段长约300bp的包装信号（ψ）介导腺病毒***组包装入病毒衣壳。对腺病毒而言，只有包括两端的ITR和包装信号（ψ）的约0.5kb的序列是顺式作用元件，也就是说必须由腺病毒载体自身携带，而其他的30余种蛋白都可以通过辅助病毒（或细胞）反式补足。

腺病毒分离与鉴定

1．分离培养 标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物，粪便和尿液等，加抗1生素处理过夜，离心取上清接种敏感细胞（293、Hep-2或HeLa细胞等），37℃孵育后可观察到典型CPE，即细胞变圆、团聚、有拉丝现象，较突出的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。

2．病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒，也可用血凝***（hemoagglutination inhibition，HI）试验或中和试验（neutralization test）检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技术进行快速鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理，取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶，孵育1～2天，用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA；PCR可用于腺病毒感1染的诊断，引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列，能检测所有血1清型，而且其敏***很高，能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻，其检出率可达80%。

***导入细胞常用方法

不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。

由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，***ery等就发现***肺1炎双球菌的DNA与***肺1炎双球菌共培养后产生***性的肺1炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低，在分子生物学和***工程工作中可采取一些方法处理细胞，经处理后的细胞就容易接受外界DNA，称为感受态细胞，再与外源DNA接触，就能提高转化效率。例如大肠杆1菌经冰冷C***2的处理，就成为感受态***，当加入重组质粒并突然由4℃转入42℃作短时间处理，质粒DNA就能进入***；用高电压脉冲短暂作用于***也能显著提高转化效率，这称为电穿孔（electroporation）转化法