随机引物扩增技术(arbitrary primedPCR, AP- PCR)
AP-PCR技术通过随意设计或选择一个非特异性引物.在PCR反应体系中.首先在不严格条件下使引物与模板中许多序列通过错配而复性。如果在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在,则可经Taq酶的作用使引物延伸而发生DNA部分片段的扩增。经一至数轮不严格条件下的PCR循环后,再于严格条件下进行扩增。扩增的产物经DNA测序凝胶电泳分离后.经放1射性自显影或荧光显示即可得到DNA***图。AP-PCR用于肿1瘤的******、******的分离;菌1种、菌株及不同物种的鉴定;遗传作图;不同分化程度或某些不同状态下的***的***表达差异等方面的研究。
差示PCR (differential PCR, d -PCR)技术
d-PCR可以定量检测标本靶***的拷贝数。它是将目的***和一个单拷贝的参照***置于一个试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带,比较两条区带的丰度,或在引物5°-端标记上放1射性核素后.通过检测两条区带放1射性强度即可测出目的***的拷贝数。
定量PCR(quantitative PCR, qPCR)技术
qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量,涉及目的mRNA和内标用相同的引物共同扩增.但扩增出不同大小片段的产物.可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用 于研究***表达。能提供特定DNA***表达水平的变化.在***1症、代谢紊乱及自身免1疫性***的诊断和分析中很有价值。
***分型
PCR可用于检测特定细胞或生物体中等位***的序列差异。例如,***敲除和敲入小鼠等生物的***分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼,可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异。
但是如果为了检测特定核苷酸突变,则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如, PCR扩增子测序就是研究单核苷酸变异(SNVs)和单核苷酸多态性(SNP)的方法之一。强烈推荐使用高保真DNA聚合酶,以防止在PCR过程中引入多余的突变。
通过PCR进行***分型也是对***1症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。
原位PCR仪
它是由主机,加热模块,玻片,热盖,控制软件组成。主要是应用对细胞或***内的DNA部分片段进行原位扩增分析-即***分析,如病源***在细胞的位置或目的***在细胞内的作用位置等。是保持细胞或***的完整性,使PCR反应体系渗透到***和细胞中,在细胞的靶DNA所在的位置上进行***扩增,不但可以检测到靶DNA,又能标出靶序列在细胞内的位置,于分子和细胞水平上研究***的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。它无需将细胞破碎提取DNA,细胞内有DNA酶的作用扩增受到一定的影响,使用不是很普遍。
该仪器主要应用于***临床研究,如***细胞等。
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