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作者:友名生物2022/3/2 3:15:45







胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种,EC3.4.21.4。在脊椎动物中,作为消化酶而起作用。在胰脏是作为酶的前体胰蛋白酶原而被合成的。作为胰液的成分而分泌,受肠激酶,或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶,是肽链内切酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用,而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体,起活化作用。是特异性***强的蛋白酶,在决定蛋白质的氨基酸排列中,它成为不可缺少的工具。



蛋白表达系统

蛋白表达系统是指由宿主、外源***、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源***在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成:

1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为***、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表达蛋白的种类也不相同。

2、载体。载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同,分为原核(***)表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源***片段。通过载体介导,外源***可以在宿主中表达。

3、辅助成分。有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状病毒表达体系中的杆状病毒。



蛋白表达系统分类及优劣分析

原核蛋白表达系统既是***常用的表达系统,也是经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以大肠杆1菌表达系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点,缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制,如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠,得到具有生物活性的蛋白的几率较小。

酵母蛋白表达系统以甲1醇毕赤酵母为代表,具有表达量高,可诱导,糖基化机制接近高等真核生物,分泌蛋白易纯化,易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解,表达量不可控。

哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制比较接近体内的天然形式,相对容易保留生物活性,缺点是表达量通常较低,稳定细胞系建立技术难度大,生产成本高。



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