1.人ELISA***盒在测定时，受检标本（测定其中的antibody或抗原）与固相载体表面的抗原或antibody起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原antibody复合物与液体中的其他物质分开。　　

2.再加入酶标记的抗原或antibody，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。　　

3.加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。　　

4.由于酶的催化效率很高，间接地放大了免1疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定antibody。　　

5.然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的才能充分发挥其方法学的优点。

在选用支原体PCR法检测来替代药典方法时，需要考虑如下两个方面：

首先一步是要使用符合欧洲药典要求，经过全方面验证的支原体检测***盒，第二部是自我验证，即确认所用的样本基质对于该***盒方法是合适的，并且操作过程是正确的。小规模的室内验证通常需要采用三个不同批次的***盒，然后加入10CFU的标准品，做复孔（通常是8个复孔），并且至少选择3个支原体物种进行验证。

有的支原体标准品厂家会提供CFU与***拷贝数的比值，以方便二者的换算。因为10CFU只能确定PCR能够达到的检测限在10CFU以下，但无法具体确定灵敏度的数值。带DNA拷贝数标定的***组DNA标准品则可进一步确定检测限的数值。

总之，PCR方法很有用，但需要避免假阴性，验证时应使用阳性对照、阴性对照、无模板对照和内控对照，以保证PCR反应正常，以及支原体少量存在时确实能检出来，支原体不存在时也确保是结果阴性，从而使得PCR方法在工业应用时能确保***终结果的可靠。

DNA提取过程中各种***的作用及原理

　　溶液I—溶菌液：

　　溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到***。

　　葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

　　EDTA：

　　(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，***脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);

　　(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。