细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

细胞的鉴定

1. u表面标志分子鉴定iPS细胞能够表达多能iPS细胞特异的表面标志分子，如：ssea-1（阶段特异性胚胎抗原1），ssea-3等。这些物质在已分化体细胞表面不表达，从而鉴定。

2. u表观遗传状态鉴定iPS细胞与ES细胞具有相似的DNA甲1基化模式和组蛋白修饰情况。iPS细胞中的多能***，如oct-4，Nanong等的启动子区域CpG岛从高甲1基化转变为类似ES细胞的低甲1基化状态。

3.u***表达模式和发育潜能鉴定d. uES和iPS细胞***表达谱基本相同。iPS细胞具有发育为三个胚层的能力，并能参与生殖系的发育，这与ES细胞相同。iPS细胞的多能***启动子区域具有与ES细胞相同的高的H3K4Me3及低H3K27Me3水平。

iPS研究方向

1．解析诱导体细胞重编程为IPS细胞的分子机制

2．研究 iPS细胞生物学特性和行为(如自我copy、增殖和分化等)调控的机制及IPS细胞体外定向诱导分化机制

3．提高iPS细胞制备效率

4．充分评价iPS细胞临床应用的安全性

5．建立有效、安全、实用制备人iPS细胞的方法，即在阐明体细胞重编程为iPS细胞机制的基础上建立无遗传修饰的IPS细胞制备策略与方法(如仅利用一些小分子物质即将人的细胞重编程为iPS细胞)

6．在前一项研究的基础上，探索一条简便制备“个体特异的”或“***特异的”治1疗型人iPS细胞的技术路线和方法