植物细胞培养

⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质，如medicine的过程，植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。

⑵激1素：植物细胞的分裂和生长特别需要植物激1素的调节，促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是基本的激1素。植物细胞的分裂，生长，分化和个体生长周期都有相应的激1素参与调节。和动物细胞相比，植物细胞离体培养对激1素要求的原理已经了解，其应用技术也已相当成熟，已经有一套能使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、激1素、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。

细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

加入lml冻存液（90%血1清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙1醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

经过了近十多年既漫长又短暂的发展，iPS细胞技术已经取得了举世瞩目的进展。一个个突破性的成果既给我们带来了喜悦，也带来了新的挑战，细胞重编程有望迎来一个新的研究浪潮。尽管iPS细胞有着诱人的应用前景，然而，未来iPS细胞的研究也面临着许多亟需解决的问题：

首先，效率问题。目前，诱导产生iPS细胞的率仍然很低，这与***导人的方式整合位点、表观遗传学等多种因素有关。这已成为制约iPS从实验室走向临床的***大瓶颈。因此，如何提高iPS细胞的制备效率仍是人们普遍关注的问题。

第二，安全性问题。现在诱导iPS细胞通常借助逆转录病毒为载体，将几种******转入分化细胞诱导其成为iPS细胞，而这种方法就有可能会因为外源***插入细胞***组，干扰了内源***的表达，从而诱发cancer。

细胞膜细胞壁的内侧紧贴着一层极薄的膜，叫做细胞膜（Cell Membrane）。这层由蛋白质分子和磷脂双分子层组成的薄膜，水和氧气等小分子物质能够自由通过，而某些离子和大分子物质则不能自由通过。因此，它除了起着保护细胞内部的作用以外，还具有控制物质进出细胞的作用：既不让有用物质任意地渗出细胞，也不让***物质轻易地进入细胞。此外，它能进行细胞间的信息交流。细胞膜在光学显微镜下不易分辨。用电子显微镜观察，可以知道细胞膜主要由蛋白质分子和脂类分子构成。在细胞膜的中间，是磷脂双分子层，这是细胞膜的基本骨架。在磷脂双分子层的外侧和内侧，有许多球形的蛋白质分子，它们以不同深度镶嵌在磷脂分子层中，或者覆盖在磷脂分子层的表面。这些磷脂分子和蛋白质分子大都是可以流动的，可以说，细胞膜具有一定的流动性。细胞膜的这种结构特点，对于它完成各种生理功能是非常重要的。