腺病毒是无胞膜的线性双链DNA病毒,目前腺病毒科分为5个属,有多种型别的腺病毒已经被开发为***转移载体,在基础科研、***cure和载体疫1苗领域得到广泛应用。
腺病毒的***组长约26-46kb,这使得腺病毒载体的构建与常见质粒载体(一般长度小于10kb)不同。太长的***组使得在腺病毒载体上富集一个多克1隆位点非常困难。针对重组腺病毒的构建,开发了多种方法。
目前已有的腺病毒载体系统均存在缺陷,有些构建步骤繁琐,耗时较长,有些在重组病毒中引入了不必要的外源序列,有些不能用于重组腺病毒的反向遗传改造。近年来,新的生物特性不同的腺病毒不断被发现,因此,本领域对构建过程更加快捷简便的、人工改造更加方便灵活的腺病毒载体系统和重组病毒构建方法存在需求。
位点特异性重组法
这类方法使用来源于噬菌体的重组酶,这类重组酶能够识别特异性序列位点(长度数十碱基对至数百碱基对)并引发含有该位点的序列之间的重组;在腺病毒骨架和穿梭质粒中添加重组酶能够识别的特异性位点,在细胞内表达对应的噬菌体重组酶或体外使用重组酶,介导骨架质粒和穿梭质粒之间的位点特异性重组,将目的***引入骨架质粒,形成带有重组腺病毒***组的腺病毒质粒;转染包装细胞,进行病毒载体拯救。该方法进一步简化了腺病毒质粒的制备过程,它的缺限是在腺病毒***组的某些部位不可避免的残留了重组酶特异性识别位点。
腺病毒传播特点
宿主范围广对人致病性低,腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感1染一系列哺乳动物细胞,因此在大多哺乳动物细胞和***中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是:腺病毒具有嗜上皮细胞性,而人类的大多数的肿1瘤就是上皮细胞来源的。另外,腺病毒的copy***和致病***均已相当清楚,在人群中早已流行(70-80%成***内都有腺病毒的中和抗1体存在)。人类感1野1生型腺病毒后仅产生轻微的自限性症状,且病毒唑cure有效。
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