甘油三酯(TG)检测***盒(比色法),#KTB2200:用异丙1醇抽提取TG,KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸,Periodic acid氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与Acetylacetone缩合生成***物质,在420 nm有特征吸收峰,其颜色的深浅与TG含量成正比。该***盒提供了一种简单的检测方法检测动物***、细胞、serum(浆)以及植物样本中甘油三酯(TG)的含量水平;而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。
游离胆固醇(FC)检测***盒(比色法),#KTB2210:胆固醇氧化酶催化游离胆固醇(FC)生成△4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500 nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。该***盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本如动物***、细胞(***)、serum(浆)中游离胆固醇(FC)的含量水平;而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。
酵母***组DNA提取好方法
DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫CN酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有;硅质材料、阴离子交换树脂等。
提取***组DNA和细胞核DNA是不同的方法
提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行
SDS十二***磺酸钠:可***细胞膜、核膜,并使***蛋白与DNA分离
CATB是一种抽提液,***细胞膜的~
DNA不溶于异丙1醇,异丙1醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了
DNA提取过程中各种***的作用及原理
溶液II-NaOH-SDS液:NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。 在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6, 因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS:
SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而***细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。 但是SDS能***核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中 (用RNase去除RNA时)受到干扰。
提取DNA常用的方法
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb
二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
四.异丙1醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)
五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。
七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。
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