真核细胞同源重组法
1994 年,Graham F建立了在293细胞同源重组产生重组腺病毒的方法。这个方法需要2个质粒:骨架质粒含有腺病毒绝大部分***组序列,但不含有包装信号;穿梭质粒含有ITR、包装信号和目的***克1隆位点,以及两段与骨架质粒有重叠的序列。将目的***克1隆到穿梭质粒,与骨架质粒共转染293细胞,由于这两个质粒的部分序列有重叠,能够在细胞内发生同源重组,***终产生完整的载体***组,并包装出重组病毒颗粒。该方法曾经被广泛使用,推动了腺病毒载体的发展。由于细胞内重组效率低,某些重组事件还可能产生可copy病毒(RCV),必需经过噬斑纯化才能获得正确的克1隆化的重组病毒,费时费力,正逐渐被其他方法替代。
***导入细胞常用方法
噬菌体进入宿主***,病毒进入宿主细胞中繁殖就是感1染(infection)。用经人工改造的噬菌体活病毒作载体,以其DNA与目的序列重组后,在体外用噬菌体或病毒的外壳蛋白将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒,就能以infection的方式进入宿主***或细胞,使目的序列得以copy繁殖。infection的效率很高,但DNA包装成噬菌体或病毒的操作较麻烦。
***(遗传因子)是产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列。***支持着生命的基本构造和性能。储存着生命的种族、血型、孕育、生长、凋亡等过程的全部信息。环境和遗传的互相依赖,演绎着生命的繁衍、细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程。生物体的生、长、衰、病、老、死等一切生命现象都与***有关。它也是决定生命健康的内在因素。因此,***具有双重属性:物质性(存在方式)和信息性(根本属性)。带有遗传信息的DNA段称为***,其他的DNA序列,有些直接以自身构造发挥作用,有些则参与调控遗传信息的表现。组成简单生命少要265到350个***。(这涉及***工作组的力量,人类的***工作组与果蝇的基本相似)
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